白腐菌(trametespubescensmb89)漆酶的培养与纯化

[目的]通过培养白腐菌trametespubescens提取胞外漆酶.[方法]以白腐菌t.pubescensmb89为漆酶培养菌,在25℃120r/min条件下用基础gp液体培养基(300ml培养基中含40g/l丙三醇、15g/l蛋白胨和1g/lmgso4·7h2o)进行胞外漆酶的震荡培养,培养10d后,添加cuso4·5h2o使培养基中cu2+的最终浓度达1mmol/l.定时测定漆酶活力,于漆酶活力开始下降时终止培养.将菌体破碎、离心后,用deae-ssepharose对获得的漆酶进行分离和纯化.[结果]在以葡萄糖为碳源的培养基中添加一定浓度的cu2+,可促进菌体的生长和漆酶活力的增加.培养前10d,漆酶活力增加缓慢,培养10d后添加cuso4·5h2o,漆酶活力快速增加,并于培养的第19天达到最大,为51.70u/ml.用超滤方法分离纯化漆酶,可使漆酶纯度达53%.[结论]t.pubescensmb89可作为生产漆酶的菌种,在漆酶培养过程中,cu2+对漆酶活力的增加有促进作用.