mir-590-5p和mir-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究mir-590的两个臂―mir-590-5p和mir-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响，以及参与肿瘤发生发展的机制。方法利用mirna芯片、qpcr对肝癌标本和各细胞株mir-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将mir-590mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞，mtt生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。targetscan预测mir-590-5p和mir-590-3p的靶基因，并通过萤光素酶报告系统以及westernblot进行验证。结果mirna芯片结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellularcarcinoma,hcc）组织相对于癌旁正常组织，mir-590-5p和mir-590-3p表达上调。通过qpcr验证了10例临床hcc肿瘤标本发现80%的hcc组织相对于癌旁组织mir-590-5p和mir-590-3p均同步显著上调。qpcr结果进一步发现，hepg2、hep3b、huh7三株hcc细胞株相对于正常肝细胞株l-o2mir-590-5p/3p同样表达上调。mtt和软琼脂克隆形成结果显示，l-o2分别过表达mir-590-5p和mir-590-3p，细胞的增殖能力都显著增加（p<0.05）；而hepg2、hep3b、huh7分别下调mir-590-5p和mir-590-3p的表达后，细胞的增殖能力也都显著降低（p<0.05）。targetscan预测，pdcd4和pten分别作为mir-590-5p和mir-590-3p的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及westernblot结果显示mir-590-5p和mir-590-3p可以分别直接下调靶基因pdcd4和pten的表达（p<0.05）。进一步我们发现mir-590-3p通过下调pten激活pi3k-akt信号通路，促进akt1-s473的磷酸化水平。结论在hcc发展过程中mir-590扮演着重要的致癌因子角色，我们结果发现mir-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能，它们分别通过靶向调节抑癌基因pdcd4和pten的表达来促进hcc细胞的增殖和存活，并激活核心的pi3k-akt肿瘤信号通路。由此可见mir-590在hcc发生发展过程中具有重要的意义，也可作为临床诊治潜在的新靶标。