%0 Journal Article
%T Construction of high-level expression vector for Bacillus thuringiensis<br>苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建
%A LI Chao-Rui
%A DU Li-Xin
%A PENG Qi
%A LIANG Ying-Ping
%A GAO Ji-Guo
%A ZHANG Jie
%A SONG Fu-Ping
%A <br>李朝睿
%A 杜立新
%A 彭琦
%A 梁影屏
%A 高继国
%A 张杰
%A 宋福平
%J 微生物学通报
%D 2013
%I 
%X 【目的】通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性, 筛选出一个强启动子, 利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, 简称Bt)高效表达载体。【方法】利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录活性。通过扫描电子显微镜观察晶体、SDS-PAGE、蛋白定量和生物活性测定等方法对新建高效表达载体进行功能验证。【结果】构建了Pcry1A、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E 4个启动子融合报告基因lacZ的表达载体, 经β-半乳糖苷酶活性分析得知, 启动子活性从高到低依次为Pcry8E>Pcry1A>Pcry4A>Pcry3A。选取cry8E启动子, 以pHT315作为基础载体构建苏云金芽胞杆菌高效表达载体pHT315-8E21b, 将cry1Ac基因连接到pHT315-8E21b和广泛应用的cry3A启动子指导的pSXY-422b上, 分别转入无晶体突变株HD-73?, 获得菌株HD-8E1Ac和HD-422-1Ac。扫描电子显微镜观察显示, HD-8E1Ac菌株可以形成菱形晶体, 说明正确表达了cry1Ac基因。SDS-PAGE分析结合蛋白定量实验表明pHT315-8E21b表达效率高于pSXY-422b。对小菜蛾(Plutella xylostella)的生物活性测定表明HD-8E1Ac菌株对小菜蛾有生物活性, 且菌株活性高于HD-422-1Ac。【结论】利用强启动子Pcry8E构建了一个能在Bt中高效表达的穿梭载体pHT315-8E21b, 该载体可正确表达cry1Ac基因, 其表达效率高于被广泛应用的pSXY422b。
%K Bacillus thuringiensis
%K cry8E promoter
%K cry3A promoter
%K Expression vector<br>苏云金芽胞杆菌
%K cry8E启动子
%K cry3A启动子
%K 表达载体
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=78024727B5F4EF6AA9CA8E605B5FC464&aid=9C65539B20E123FC77DA379AC74137BA&yid=FF7AA908D58E97FA&vid=1371F55DA51B6E64&iid=0B39A22176CE99FB&sid=406BF8ED3BCE1927&eid=3E3EF0DB5E6F2DA9&journal_id=0253-2654&journal_name=微生物学通报&referenced_num=0&reference_num=0