%0 Journal Article
%T Detection of Yersinia pestis sRNA by digoxigenin-labeled Northern blot<br>地高辛标记的Northern blot检测鼠疫菌sRNA
%A Zhongliang Deng
%A Shanchun Su
%A Xiangrong Meng
%A Yimou Wu
%A Ruifu Yang
%A Yanping Han
%A <br>邓仲良
%A 苏山春
%A 孟祥荣
%A 吴移谋
%A 杨瑞馥
%A 韩延平
%J 微生物学报
%D 2013
%I 
%X 摘要:【目的】随着高通量测序方法的应用，越来越多的sRNA(small non-coding RNA，sRNA)需验证。本研究建立用地高辛标记Northern blot检测鼠疫菌sRNA的技术，为细菌sRNA 验证提供一种灵敏、特异的方法。【方法】在低铁条件下，提取鼠疫菌总RNA，10% dPAGE分离后电转到尼龙膜上并用紫外线交联RNA。膜经地高辛标记RyhB1或RyhB2寡核苷酸RNA探针过夜杂交后洗脱、封闭和免疫检测，最后曝光显影。【结果】地高辛标记的Northern blot曝光时间为20 s－3 min，RyhB1或RyhB2检测灵敏度分别为0.005 μg和 0.05 μg。RyhB1或RyhB2探针特异性好，相互间无交叉反应。带正电或中性的尼龙膜都适用于杂交反应。RNA 探针在42℃－65℃内杂交均可，提高温度可减少非特异性反应;而DNA 探针杂交温度需摸索。【结论】本研究成功构建一种地高辛标记Northern blot检测鼠疫菌sRNA技术，具有特异性好、灵敏度高、探针易保存、曝光时间短等优点，为细菌sRNA验证和功能研究提供有利工具。
%K 关键词:sRNA，RNA
%K 寡核苷酸探针，地高辛，Northern
%K blot
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=A3C6BA55AB623B90FA9104CFFC826F3C&aid=62DBC20A59286BA39E3D5CBF4D751184&yid=FF7AA908D58E97FA&vid=8E6AB9C3EBAAE921&iid=38B194292C032A66&sid=2AC7DCCBBC26ECF8&eid=88D36036CFF69B3C&journal_id=0001-6209&journal_name=微生物学报&referenced_num=0&reference_num=0