%0 Journal Article
%T Molecular Cloning, Co-expression and Characterization of dhaF and dhaG Genes Encoding Glycerol Dehydratase Reactivating Factor of Citrobacter freundii<br>弗氏柠檬酸菌甘油脱水酶激活因子基因的克隆、表达与功能鉴定
%A QI Xianghui Tian LIANG
%A <br>齐向辉
%A 梁甜
%A 曹博
%A 罗兆飞
%A 韦宇拓
%A 杨登峰
%A 黄日波
%J 中国生物工程杂志
%D 2009
%I 
%X 1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,其生物法生产的研究逐渐受到的关注.研究以弗氏柠檬酸菌的总DNA为模板,通过PCR分别扩增出约1.8kb(dhaF)和0.4kb(dhaG)的两个基因片段分别编码甘油脱水酶激活因子大、小亚基,连接于pMD-18T载体,测序分析显示与GenBank中相关基因的相似性最高为86%.将两基因以多顺反子的方式与pSE380连接构建表达载体,并在大肠杆菌中进行高效表达,表达量占总蛋白的30%.将高效表达的激活因子用金属亲合层析和分子筛进行了纯化,得到电泳纯级的甘油脱水酶激活因子,SDS-PAGE分析显示:大、小亚基分子量约为63kDa和12kDa;非变性胶分析显示:全酶的分子量约为150kDa,经扫描分析推测甘油脱水酶激活因子很有可能是以α2β2方式结合的.以弗氏柠檬酸菌甘油脱水酶为研究对象,进行激活实验,结果证实该激活因子具备甘油脱水酶激活因子的功能,为进一步阐明甘油脱水酶的激活机制及1,3-丙二醇的高效生产奠定了基础.
%K Glycerol dehydratase
%K Reactivase
%K Co-expression
%K Structure<br>甘油脱水酶
%K 激活因子
%K 协同表达
%K 结构
%U http://www.alljournals.cn/get_abstract_url.aspx?pcid=90BA3D13E7F3BC869AC96FB3DA594E3FE34FBF7B8BC0E591&jid=951380788B355DEA7D75520FA3B199C9&aid=AEC16D064BA747EA850BE133E627B41C&yid=DE12191FBD62783C&vid=771469D9D58C34FF&iid=CA4FD0336C81A37A&sid=7C3A4C1EE6A45749&eid=BE33CC7147FEFCA4&journal_id=1671-8135&journal_name=中国生物工程杂志&referenced_num=0&reference_num=11