%0 Journal Article
%T Estandarizaci車n de un ensayo inmunoenzim芍tico para la detecci車n de anticuerpos anti-ADN doble cadena en el lupus eritematoso sist谷mico Standardization of an immunoenzymatic assay to detect anti-double-stranded DNA antibodies in systemic lupus erythematosus
%A Aym谷 Debesa Padilla
%A Oscar Hern芍ndez Betancourt
%J Revista Cubana de Investigaciones Biomˋˋdicas
%D 2012
%I ECIMED
%X Introducci車n: los anticuerpos anti-ADN doble cadena son un marcador serol車gico diagn車stico de lupus eritematoso sist谷mico (LES). El ensayo inmunoenzim芍tico en fase s車lida es una t谷cnica r芍pida y rentable para su detecci車n. Objetivo: estandarizar un ELISA que detecte anti ADN doble cadena para el diagn車stico del lupus. M谷todos: los pasos que se siguieron para la estandarizaci車n incluyeron la preparaci車n de controles, la sensibilizaci車n de la fase s車lida, la selecci車n de los amortiguadores y conjugado del ensayo, la evaluaci車n de las condiciones de reacci車n y la determinaci車n del nivel de corte. Adem芍s se realiz車 el estudio de inespecificidades. Se probaron 5 tipos de placas de poliestireno y se compararon ADN plasm赤dico de E.coli, pUC19 y ADN gen車mico humano como ant赤genos de recubrimiento. Se evalu車 el efecto de la poli-L-lisina y la irradiaci車n de la placa con luz ultravioleta, en la fijaci車n del ant赤geno. El valor de corte del ensayo se determin車 por el m谷todo del valor l赤mite. Resultados: se observ車 disociaci車n del ant赤geno cuando no se utiliz車 poli-L-lisina en el pretratamiento de la placa y la irradiaci車n con luz UV no favoreci車 la uni車n del ADN a la fase s車lida. No se encontraron diferencias significativas (p=0,710) entre ambos ADN, en el recubrimiento. El valor de corte (K=3) permiti車 clasificar como positivas 28 muestras (63,6 %) de pacientes con LES. Conclusiones: el m谷todo estandarizado, con el empleo de ADN plasm赤dico, permiti車 la detecci車n de anticuerpos anti-ADN doble cadena en pacientes con lupus. Introduction: anti-double-stranded DNA antibodies are a diagnostic serological marker for systemic lupus erythematosus (SLE). The solid-phase immunoenzymatic assay is a rapid, cost-effective technique for their detection. Objective: Standardize an ELISA detecting anti-double-stranded DNA for the diagnosis of lupus. Methods: the standardization process included the following steps: preparation of controls, sensitization of the solid phase, selection of buffers and assay conjugate, evaluation of reaction conditions and determination of the cut-off level. A study of unspecificities was also conducted. Five types of polystyrene plates were tested, and a comparison was made of E. coli (pUC19) plasmid DNA and human genomic DNA as coating antigens. An evaluation was conducted of the effect of poly (L-lysine) and irradiation of the plate with ultraviolet light upon antigen fixation. The assay cut-off value was determined by the limit value method. Results: antigen dissociation was observed when poly (L-lysine) was not used in the pretreatment of the plat
%K ADN
%K ensayos inmunoenzim芍ticos
%K ELISA
%K estandarizaci車n
%K DNA
%K immunoenzymatic assays
%K ELISA
%K standardization
%U http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-03002012000400007