%0 Journal Article
%T Isolation of plant nuclei suitable for flow cytometry from species with extremely mucilaginous compounds: an example in the genus Viola L. (Violaceae)
%A Cires
%A Eduardo
%A Cuesta
%A Candela
%A Fern¨¢ndez Casado
%A Mar¨ªa ¨¢ngeles
%A Nava
%A Herminio S.
%J Anales del Jard¨ªn Bot¨¢nico de Madrid
%D 2011
%I Consejo Superior de Investigaciones Cient¨ªficas
%X Flow cytometry analysis has been widely applied in the determination of nuclear DNA content and ploidy level in many organisms. Despite being the most appropriate method for DNA content measurement, flow cytometry also presents some limitations. A fairly common, but little-studied problem is the effect on measurements of the presence of secondary metabolites. A good example is the genus Viola, which is composed of 525-600 species distributed worldwide. These species have proved to be problematic for flow cytometric analyses due to the release of extremely mucilaginous compounds into the nuclear suspension. In this work, the genome size of 13 species of Viola using flow cytometry are presented for the first time. Despite obtaining histograms with high coefficients of variation, we here present an optimized protocol to remove cytoplasmic compounds, particularly mucilaginous ones, from plant nuclei that pave the way for its application to estimate the genome size of other species exhibiting similar problems. Statistical analyses revealed significant differences between sections Viola and Melanium, and within each section (P < 0.001). Furthermore, statistically significant differences were not detected among samples of the same species. El an¨¢lisis mediante citometr¨ªa de flujo ha sido aplicado de modo general para determinar el contenido de ADN nuclear y el nivel de ploid¨ªa en muchos organismos. A pesar de ser el m¨¦todo m¨¢s adecuado para medir la cantidad de ADN, esta t¨¦cnica tambi¨¦n presenta algunas limitaciones. Un problema bastante com¨²n, aunque poco estudiado, es el efecto de los metabolitos secundarios en los resultados obtenidos. Un ejemplo respecto a la presencia de estos compuestos se encuentra en el g¨¦nero Viola, compuesto por 525-600 especies distribuidas por todo el mundo. Las especies de este g¨¦nero ya han sido previamente descritas como problem¨¢ticas en los an¨¢lisis de citometr¨ªa de flujo debido a la presencia de compuestos extremadamente mucilaginosos en las suspensiones de n¨²cleos. En el presente trabajo se analiza por primera vez el tama o gen¨®mico de 13 especies del genero Viola mediante el empleo de citometr¨ªa de flujo. A pesar de los altos valores mostrados en los coeficientes de variaci¨®n de los histogramas, se presenta un protocolo optimizado para eliminar compuestos citoplasm¨¢ticos, y m¨¢s concretamente mucilaginosos de las suspensiones nucleares, siendo de aplicaci¨®n en la estimaci¨®n del tama o gen¨®mico de plantas con problemas similares. Los an¨¢lisis estad¨ªsticos mostraron diferencias significativas entre las secciones Viola y Melaniu
%K Chromosome number
%K flow cytometry
%K genome size
%K mucilaginous compounds
%K nuclear DNA content
%K ploidy levels
%K section Melanium
%K section Viola
%K N¨²mero cromosom¨¢tico
%K citometr¨ªa de flujo
%K tama o gen¨®mico
%K compuestos mucilaginosos
%K contenido de ADN nuclear
%K niveles de ploid¨ªa
%K secci¨®n Melanium
%K secci¨®n Viola
%U http://rjb.revistas.csic.es/index.php/rjb/article/view/362/356