%0 Journal Article
%T 地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因的克隆、烟草瞬时表达及转化拟南芥的研究
%A 李潇
%A 孙海彦
%A 阮孟斌
%A 王霈虹
%A 彭明
%J 植物学报
%P 354-362
%D 2015
%R 10.3724/SP.J.1259.2015.00354
%X ？从地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)中克隆到耐高温α-淀粉酶基因全长,构建了原核表达载体,转入大肠杆菌(Escherichiacoli)中,使用IPTG于28°C诱导6小时后,通过SDS-PAGE检测到目的蛋白,分子量约为55kDa,并通过酶活力检测实验证明该蛋白具有耐高温α-淀粉酶活性。同时构建了该基因融合GFP的植物表达载体,通过农杆菌(Agro-bacteriumtumefaciens)介导瞬时转化烟草(Nicotianatabacum)下表皮细胞并在荧光显微镜下观察,发现在烟草下表皮细胞的细胞质和液泡中均有绿色荧光。使用I2-KI溶液对乙醇脱色后的烟草叶片进行染色,显色反应表明在烟草中表达的耐高温α-淀粉酶具有酶活性。最后,采用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥(Arabidopsisthaliana)中,筛选到稳定遗传的耐高温α-淀粉酶基因的拟南芥纯合子。研究结果为后期开展表达耐高温α-淀粉酶的转基因植物的相关研究奠定了实验基础。
%K 地衣芽孢杆菌
%K 耐高温α
%K -淀粉酶基因
%K 烟草瞬时表达
%K 拟南芥
%U http://www.chinbullbotany.com/CN/abstract/abstract11660.shtml