%0 Journal Article
%T 瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建
%A 范文斌
%A 刘永斌
%A 李长青
%J 华北农学报
%P 154-157
%D 2015
%R 10.7668/hbnxb.2015.01.025
%X 为定量测定瘤胃脂肪分解菌,试验构建了脂肪分解菌实时荧光定量PCR的标准品及标准曲线。提取瘤胃微生物总DNA,以脂肪分解菌16SrDNA特异性引物进行PCR扩增,回收PCR产物,与PMD19-TVector连接并转化大肠杆菌。阳性重组质粒经PCR和测序鉴定后,将提取的质粒DNA进行梯度稀释并作为模板,利用荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果显示:PCR产物与目的基因的相似性大于99%,以不同稀释度的重组质粒为模板获得的荧光定量PCR扩增曲线差异明显,构建了相关系数接近1的标准曲线,且熔解曲线峰值单一。试验建立的实时荧光定量PCR方法可用于瘤胃脂肪分解菌的定量检测,为进一步研究该菌在反刍动物瘤胃发酵中的分子机理奠定了基础。
%K 瘤胃脂肪分解菌
%K 实时荧光定量PCR
%K 标准品质粒
%K 标准曲线
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract8382.shtml