%0 Journal Article
%T 类猪圆环病毒P1VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析
%A 王凤芝
%A 温立斌
%A 何孔旺
%A 姚火春
%A 王小敏
%J 华北农学报
%P 90-94
%D 2015
%R 10.7668/hbnxb.2015.04.016
%X 为了鉴定类猪圆环病毒P1VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1ORF1基因,利用pFastBacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及WesternBlot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经RecombinantDNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362bp的目的片段;收获接毒后72h的细胞,WesternBlot分析显示,P1ORF1重组病毒样品能够与抗P1VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。
%K P1VP1
%K 昆虫杆状病毒表达载体系统
%K RT-PCR
%K WesternBlot
%K 电镜
%U http://www.hbnxb.net/CN/abstract/abstract8492.shtml