%0 Journal Article
%T 龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达
%A 帅良
%A 李静
%A 韩冬梅
%A 吴振先
%J 华南农业大学学报
%P 91-97
%D 2015
%R 10.7671/j.issn.1001-411X.2015.03.016
%X 【目的】克隆龙眼Dimocarpuslongan己糖激酶（Hexokinase,HXK）基因，并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.【方法】以龙眼总RNA为模板，采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列，构建pET-32a-DlHXK原核表达载体，转化到大肠埃希菌EscherichiacoliRosetta(DE3)中诱导表达.【结果和结论】成功克隆龙眼己糖激酶基因的cDNA全长序列，命名为DlHXK，登录号为KF776906.1.龙眼DlHXK序列全长2101bp，包括1个1488bp的开放阅读框，预测编码495个氨基酸；进化树和相似性分析发现，该基因与温州蜜柑Citrusunshiu的相似性最高，达到了82%；荧光定量表达分析表明，DlHXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升；经IPTG诱导和SDS-PAGE检测，所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见，利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因，构建原核表达载体，并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中获得高效表达.
%K 龙眼
%K 己糖激酶
%K 基因克隆
%K 荧光定量PCR
%K 原核表达
%U http://xuebao.scau.edu.cn/zr/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=201503018&flag=1