%0 Journal Article
%T 绵羊精子赤道膜蛋白片段1(SPESP1)的克隆、原核表达及纯化
%A 马媛媛
%A 程飞跃
%A 邢万金
%J 生物技术通报
%P 155-160
%D 2015
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.023
%X 旨在克隆绵羊Spesp1cDNA并表达，得到纯化的GST-SPESP1融合蛋白。以绵羊睾丸组织总cDNA为模板，根据GenBank公布的绵羊基因组序列设计引物，PCR扩增得到Spesp1cDNA，构建原核表达重组载体pGEX-Spesp1，将其转化到E.coliBL21中表达，并优化其表达条件，利用SDS-PAGE切胶纯化法得到纯化的融合蛋白，用Westernblot鉴定所得融合蛋白。结果表明，经测序，克隆得到的Spesp1cDNA序列与GenBank中预测的cDNA序列对比有两个碱基不同，并造成一个氨基酸的差异。在E.coliBL21中成功表达重组融合蛋白，其最优表达条件为：37℃、4h、0.005%IPTG终浓度，SDS-PAGE和Westernblotting中，融合蛋白位于约64kD处并可以被抗GST和抗羊SPESP1的抗体识别，与预计相符，表明融合蛋白成功表达。成功纯化得到GST-SPESP1融合蛋白，为研究SPESP1在精卵细胞膜融合中的功能奠定了基础。
%K 绵羊
%K SPESP1
%K cDNA克隆
%K 原核表达
%K 蛋白纯化
%U http://biotech.caas.cn/CN/abstract/abstract10743.shtml