%0 Journal Article
%T 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白2ab32(cry2ab32)基因的克隆、表达与杀虫活性分析
%A 余宗兰
%A 黄刚辉
%A 李巧
%A 贺利业
%A 龚莉
%A 刘瑶
%A 李平
%A 郑爱萍
%J 农业生物技术学报
%P 727-737
%D 2015
%X ？为了扩充新的鳞翅目杀虫蛋白基因，本研究采用限制性片段长度多态性pcr(pcr-restrictedfragmentlengthpolymorphisms,pcr-rflp)方法对苏云金芽胞杆菌(bacillusthuringiensis)菌株bn23-5中所含杀虫晶体蛋白基因进行鉴定和分析。结果表明，该菌株中含有晶体蛋白(crystal,cry)cry2ab类基因。根据已知cry2ab类基因编码区设计简并引物，以菌株bn23-5全质粒dna为模板进行扩增并测序。结果显示，扩增产物为一个完整的cry2ab类基因，全长1902bp，由634个氨基酸组成，氨基酸序列与cry2ab1同源性最高(96.5%)，命名为cry2ab32(genbank登录号:kj710647)。将该基因插入表达载体pet-28a，构建重组质粒pet-2ab并转化大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(de3)，异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,iptg)诱导成功表达蛋白，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,sds-page)验证其相对分子质量为65kd左右。表达的包涵体蛋白采用饲喂法进行生物活性测定，结果表明，cry2ab32对小菜蛾(plutellaxylostella)、玉米螟(ostriniafumacalis)和棉铃虫(helicoverpaarmigera)均有杀虫活性，半致死浓度(medianlethalconcentration,lc50)分别为8.99、19.34和21.24μg/ml，对甜菜夜蛾(laphygmaexigua)的致死率不高，但能明显抑制甜菜夜蛾的生长。cry2ab32新基因的发现将为重要农业害虫的防治提供更多选择，为进一步研究cry2ab类蛋白结构和杀虫机理提供基础资料。
%K 苏云金芽胞杆菌
%K 克隆
%K 杀虫活性
%K 晶体蛋白2ab32(cry2ab32)
%U http://www.jabiotech.org.cn/CN/abstract/abstract10290.shtml