抗Ⅰ型马立克氏病毒sorf2蛋白的多克隆抗体制备及其特异性鉴定

摘要:【目的】制备高效价鼠和兔抗Ⅰ型马立克氏病毒(Marek＇s disease virus，MDV) sorf2蛋白的多克隆抗体并对其特异性进行鉴定。【方法】以Ⅰ型MDV GX0101为模板，利用PCR扩增sorf2基因，分别克隆进原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中，转化大肠杆菌BL21(Rosetta)，经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导后进行融合蛋白的表达和纯化。用纯化的融合目的蛋白常规免疫6－8周龄Balb/c小鼠和成年新西兰大白兔，制备抗sorf2蛋白的多克隆抗体。用Western blot和间接免疫荧光试验鉴定多克隆抗体的特异性。【结果】Ⅰ型MDV的sorf2基因在原核表达载体中能够正确表达，免疫小鼠和兔后能获得与sorf2蛋白发生特异性反应的高效价的多克隆抗体。【结论】制备的抗sorf2 蛋白的多克隆抗体能够特异的鉴定MDV sorf2基因缺失株，有效的区分MDV 疫苗株HVT(FC-126)与Ⅰ型MDV毒株，用于临床MDV 野毒的分离鉴定。