抗CD20单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的制备及其抗肿瘤活性

抗体融合蛋白是新一代抗肿瘤抗体药物. CD20在约95%的B细胞非霍奇金淋巴瘤表面过度表达, 是治疗B细胞淋巴瘤的理想靶点. 力达霉素(LDM)是强效烯二炔抗肿瘤抗生素, 目前已进入Ⅱ期临床阶段. 采用DNA重组技术, 利用大肠杆菌表达体系, 制备抗CD20单链抗体与力达霉素辅基蛋白LDP的基因工程融合蛋白scFv-LDP. 经纯化和复性后, ELISA和间接免疫荧光实验测定其抗原结合活性, 发现抗CD20 scFv-LDP能够与表达CD20的肿瘤细胞特异性结合. 将其与LDM的活性发色团AE进行分子组装, 得到强化融合蛋白scFv-LDP-AE. MTT结果表明, 和LDM一样, scFv-LDP-AE对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用, CD20+的Raji细胞和Daudi细胞的IC50值分别为1.21×10-11和6.24×10-11mol/L. CD20+ B细胞淋巴瘤裸鼠移植模型检测抗肿瘤活性. 接种肿瘤后第14和21天分别尾静脉注射给药, 共2次. 发现scFv-LDP-AE能够显著抑制肿瘤生长, 0.3 mg/kg剂量组抑瘤率为79.3%, 显著强于LDM可耐受剂量0.05 mg/kg (68.6%)的抑瘤率. 强化融合蛋白scFv-LDP-AE有发展成抗肿瘤抗体靶向药物的潜能.