The preparation of the recombinant Fusion protein Human Retinal Pigment Epithelium-Derived Factor and the analysis of its angiogenesis activity
重组人色素上皮细胞衍生因子融合蛋白的制备及其抑制新生血管

目的:人色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)是一种有效的新生血管形成抑制因子和神经营养因子.通过原核细胞表达人PEDF蛋白,鉴定其抑制新生血管的生物学活性.方法:采用PCR法扩增人PEDFcDNA,将其克隆到pET32a载体中,在大肠杆菌BL21中表达人PEDF蛋白.经SDS-PACE和western blot鉴定后,镍柱亲和层析法变性条件下纯化重组融合蛋白.Braclford法测蛋白浓度,采用鸡胚脲囊膜法测其对新生血管形成的影响.结果:成功构建了pET32a-PEDF表达载体.重组人PEDF蛋白在BL21宿主菌中获得了稳定高效表达,鸡胚脲囊膜实验结果显示在重组蛋白浓度为0.4、0.04 ng/Hd时均有对新生血管的显著抑制作用(P<0.01),而在4 ng/ml时无抑制作用.结论:成功高效表达及纯化了重组人PEDF蛋白,鉴定其抑制新生血管的生物学活性,并且证实该活性在一定范围内有效,为进一步研究其功能及推广应用奠定了基础.