Prokaryotic expression and acetylation assays of histone acetyltransferase PCAF
组蛋白乙酰转移酶PCAF在原核细胞的表达及其生物学活性检测

p300/CBP 相关因子(p300/CBP-associated factor,PCAF)是真核细胞内一种重要的组蛋白乙酰转移酶,它主要通过催化核心组蛋白的乙酰化,促进特定基因的转录,参与细胞内多种生物学过程.国内目前尚没有制备出具有生物学活性的组蛋白乙酰转移酶PcAF的报道.为此,PCAF全长cDNA被克隆入原核表达载体pGEX-5X-1,通过对诱导条件进行优化,实现了PCAF在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中的高效可溶性表达并进行了亲和纯化.利用体外乙酰转移酶活性分析实验,检测到所表达的GST-PCAF融合蛋白能够使组蛋白H3发生乙酰化.这种具有生物学活性的PCAF蛋白的成功制备为进一步研究PCAF的转录调控功能以及它与其它蛋白间的相互作用奠定了基础.