Development and application of real-time fluorescence quantitative PCR detection method of human specific genetic markers from fecal anaerobes
人类特异性粪厌氧菌基因标记物实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

针对人类粪便污染,选择来源于拟杆菌和双歧杆菌16S rRNA的基因片段作为标记物,分别建立了相应的实时荧光定量PCR检测方法。选取不同来源的粪便样品进行检测,证实了引物的特异性。回收纯化从污水中扩增所得的目标PCR片段,经过连接转化,筛选阳性克隆提取其重组质粒作为实时荧光定量PCR的标准品。通过检测一系列梯度稀释的标准品,确定了拟杆菌基因标记物和双歧杆菌基因标记物定量PCR检测方法分别在1.98×102～1.98×107copy/μL和2.12×101～2.12×107copy/μL范围内具有良好的线性关系。