密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

为了提高流感病毒血凝素（HA）基因的表达量及其免疫原性，按照哺乳动物偏爱密码子 A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造，然后插入到真核表达载体pCI-neo中，构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹（WB）实验比较HA蛋白的表达量．将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠，比较两者诱导的抗体产生水平．三次免疫后两周用强毒攻击，通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果．IPMA和WB实验结果表明：密码子优化后，HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高．酶联免疫吸附实验（ELISA）结果表明：小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高．攻毒试验结果表明：两种重组质粒均能够提供较好的保护．