家蚕Bcl-2家族基因BmBuffy的克隆及表达分析

【目的】本研究旨在获得家蚕BombyxmoriBcl-2家族同源基因，并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用cDNA末端快速扩增方法（rapidamplificationofcDNAends,RACE）克隆家蚕Bcl-2家族基因BmBuffy，利用SSR分子标记连锁分析确定其染色体定位。同时，用RT-PCR和qPCR技术分析该基因在家蚕幼虫及变态期间不同组织中的表达。【结果】克隆获得全长家蚕Bcl-2家族同源基因BmBuffy，证明该基因位于第4号染色体上，开放阅读框长879bp，编码292aa，预测其分子量大小为32.4kDa，等电点为9.94，且第130-231位氨基酸之间存在1个Bcl-2_likeSuperfamily结构域。系统进化发育树表明，其与黑腹果蝇Drosophilamelanogaster的DmBuffy关系最近，氨基酸序列一致性为27%。BmBuffy在幼虫组织中的表达结果显示，其在马氏管中表达量最高，而且在不同组织变态期的关键时间点均有明显变化。【结论】家蚕BmBuffy具有Bcl-2家族典型结构域，BmBuffy定位于第4号染色体上，BmBuffy在家蚕变态期的组织生理变化中起到一定作用。本文为进一步研究家蚕Bcl-2家族基因的功能奠定基础。