间接原位rt-pcr法检测辣椒叶组织中辣椒轻斑驳病毒的分布

为了了解辣椒轻斑驳病毒（peppermildmottlevirus，pmmov）在辣椒组织中的分布特点，探索利用间接原位rt-pcr技术对病毒在辣椒组织中进行定位。利用改进的ctab法从辣椒叶片中提取总rna，利用rt-pcr技术扩增出pmmov的特异片段，并经克隆测序，证明其为pmmov的特异片段。利用pcr技术，制备出了地高辛标记的特异cdna探针。对原位rt-pcr反应体系进行优化，经过切片制备（切片厚度7μm、应用superfrostplus正电荷防脱载玻片）、预处理（1mg?l-1蛋白酶k消化5min）、rt-pcr（37℃反转录2.5h、pcr退火温度为58℃）、杂交检测，建立了应用间接原位rt-pcr技术检测pmmov在辣椒组织中分布的方法。原位rt-pcr结果显示，叶片组织中pmmov阳性信号主要分布于栅栏组织，其次是海绵组织，表皮组织中也有少量阳性信号。此外，叶柄中可见少量阳性信号，主要位于表皮组织。