慢病毒介导shRNA沉默YAP基因对人前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体的影响

目的：探讨慢病毒介导shRNA沉默Yes-相关蛋白（Yes-associatedprotein，YAP）基因对人激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体（androgenreceptor，AR）的影响。方法：3条针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体感染LNCaP细胞，经嘌呤霉素筛选后建立稳定感染细胞系，real-timePCR、Westernblot分别检测感染后各组细胞YAP、ARmRNA和蛋白水平；选取沉默效果最佳shRNA慢病毒干扰载体组，以细胞增殖/毒性检测（cellcountingkit-8，CCK-8）、平板克隆形成实验（colonyformation）检测LNCaP细胞增殖能力；流式细胞仪（flowcytometry，FCM）检测LNCaP细胞凋亡改变。结果：重组慢病毒成功感染前列腺癌LNCaP细胞，经嘌呤霉素筛选后感染效率达95%以上，获得稳定沉默YAP基因LNCaP细胞系。与空白对照组和阴性对照组比较，感染shRNA慢病毒干扰载体各组中YAP、ARmRNA及蛋白表达水平明显下调（P=0.000），细胞增殖受到明显抑制（P=0.000），细胞凋亡明显增加（P=0.000）。结论：慢病毒介导shRNA沉默YAP基因能有效下调YAP在LNCaP细胞中表达，并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡；YAP可能作为AR配体参与AR信号通路的调节。