细胞毒性化疗药物表柔比星对HBV复制水平影响的体外试验

目的：在体外研究细胞毒性化疗药物表柔比星对乙肝病毒（hepatitisBvirus，HBV）复制水平的影响。方法：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide，MTT]法检测0、0.1、0.5、1.0μmol/L不同浓度表柔比星对HBV稳定细胞系HepG2.2.15细胞和HepG2-HBV1.1细胞活力的影响。将药物直接添加在HepG2.2.15细胞和HepG2-HBV1.1细胞中，提取细胞内及上清中的HBV复制中间体，通过real-timePCR法和southern-blot法检测HBVDNA拷贝量。结果：HepG2.2.15细胞分别经0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星处理后，细胞内HBV病毒拷贝量（×106）分别是3.53±0.26、5.39±0.23、9.40±0.92、19.07±1.47，各组间有统计学差异（F=10.984，P=0.005）。同样，HepG2-HBV1.1细胞也分别经0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星处理后，细胞内HBV病毒拷贝量（×106）分别是2.80±0.37、5.14±0.49、14.24±1.29、26.59±1.98，各组间有统计学差异（F=13.122，P=0.003）。Southern-blot检测表明HepG2.2.15细胞内HBVDNA复制中间体相对量在对照组（0μmol/L表柔比星）和处理组（0.5μmol/L表柔比星）中分别为（1.00±0.01）和（1.53±0.05），对照组和药物处理组比较有统计学差异（t=19.202，P=0.002）。同样，HepG2-HBV1.1细胞内HBVDNA复制中间体相对量，在对照组和处理组中分别为1.01±0.02、3.12±0.20，对照组和药物处理组比较有统计学差异（t=18.034，P=0.003）。上述结果提示表柔比星促进细胞内HBV的复制。HepG2.2.15细胞分别经0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星处理后，细胞上清液中HBV病毒拷贝量（×106）分别是2.37±0.22、3.50±0.27、6.02±0.56、17.74±0.96，各组间有统计学差异（F=20.726，P=0.001）。同样，HepG2-HBV1.1细胞也分别经0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星处理后，细胞上清液中HBV病毒拷贝量（×106）分别是3.75±0.35、6.05±0.48、10.28±1.01、20.86±1.81，各组间有统计学差异（F=14.761，P=0.002）。Southern-blot检测表明HepG2.2.15细胞上清中HBVDNA复制中间体相对量，在对照组和药物处理组中分别为1.08±0.02和2.69±0.05，对照组和药物处理组比较有统计学差异（t=58.33，P=0.000）。同样，HepG2-HBV1.1细胞内HBVDNA复制中间体相对量，在对照组和药物处理组中分别为1.03±0.01、3.52±0.05，对照组和药物处理组比较有统计学差异（t=85.801，P=0.000）。该结果提示表柔比星促进细胞分泌或释放更多的HBV到细胞上清液中。结论：表柔比星有直接的促HBV复制的作用，该作用可能成为化疗后HBV再激活的新机制。