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ISSN: 2333-9721
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类猪圆环病毒P1VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析

DOI: 10.7668/hbnxb.2015.04.016, PP. 90-94

Keywords: P1VP1,昆虫杆状病毒表达载体系统,RT-PCR,WesternBlot,电镜

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Abstract:

为了鉴定类猪圆环病毒P1VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1ORF1基因,利用pFastBacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及WesternBlot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经RecombinantDNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362bp的目的片段;收获接毒后72h的细胞,WesternBlot分析显示,P1ORF1重组病毒样品能够与抗P1VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。

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