鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究

【目的】构建原核表达载体pET28a-rChIFN-α-ChIL-18、大肠埃希菌Escherichiacoli表达及产物纯化与活性检测，研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂，以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR（FusionPCR）方法，利用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素（Chickeninterferonalpha，ChIFN-α）与鸡白细胞介素18（Chickeninterleukin-18，ChIL-18）基因构建ChIFN-α-ChIL-18融合基因并克隆入pET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白，并进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-ChIL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒（VSV）及新城疫病毒（NDV）增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了pET28a-rChIFN-α-ChIL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的rChIFN-α-ChIL-18蛋白相对分子质量约为38000，蛋白经纯化后纯度在90%以上.rChIFN-α-ChIL-18蛋白在鸡胚成纤维（CEF）细胞上具有明显抗病毒活性，其抗VSV和NDV的活性明显高于单一rChIFN-α、rChIL-18蛋白的抗病毒活性.