羊草CDPK基因全长cDNA的克隆及原核表达

【目的】通过对羊草LeymuschinensisCDPK基因进行克隆及原核表达，为进一步研究CDPK基因的功能，探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.【方法】用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶（CDPK）基因，命名为Lc-CDPK；构建了羊草CDPK基因的原核表达载体，转化到大肠埃希菌EscherichiacoliBL21(DE3)，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后，经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况.【结果和结论】羊草CDPK基因全长cDNA序列为1704bp，包括1个1647bp的开放阅读框，编码548个氨基酸，从第81~339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域，有4个保守的EF手型结构域；编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现，与小麦CDPK基因的相似性最高，相似度为96%；IPTG诱导表达出相对分子质量为61350的融合蛋白，表达产物大小与预计理论值相符.诱导7h蛋白表达量最高，表达量占菌体总蛋白的49.1%.