柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因的克隆、原核表达及酶活性分析

？旨在克隆柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶（etdxr）基因，初步分析etdxr的酶活性。根据eupathdb数据库信息注释、拼接etdxr基因序列，设计特异性引物扩增etdxr基因，构建原核表达质粒pcoldi-etdxr，转化e.colirosetta（de3），iptg诱导表达，进行sds-page及westernblot分析，纯化retdxr，对retdxr进行酶活性分析，测定ph和mg2+离子浓度对酶活性的影响。结果显示，etdxr基因完整编码序列为1746bp，氨基酸序列具有与其他物种高度保守的酶活性中心；成功构建原核表达质粒pcoldi-etdxr，sds-page以及westernblot分析显示，得到约50ku的蛋白质；利用直接检测底物nadph消耗速率的方法分析etdxr酶活性，结果显示，不同ph和离子浓度对etdxr的酶活性有显著影响，其最佳的酶反应条件为ph7.0，mg2+离子浓度4.5mmol？l-1。本研究为进一步以etdxr为药靶筛选抗球虫先导化合物奠定了基础。