拟南芥双油体蛋白融合表达kgf-2及其生物学活性研究

目的:构建p1301-yo-k2-yo双油体kgf-2融合蛋白表达载体并转化拟南芥,与p1301-yo-k2单油体kgf-2融合蛋白表达载体对比,观察是否能够提高外源蛋白kgf-2的表达量,并对融合蛋白生物学活性进行鉴定。方法:pcr获得拟南芥油体蛋白oleosin和kgf-2核心区基因片段,融合pcr获得kgf-2-oleosin融合基因,与包含有一个oleosin的p1301-oleosin载体连接,构建p1301-yo-k2-yo(oleosin-kgf-2-oleosin)表达载体,利用农杆菌介导法将其转入拟南芥中进行表达,除草剂筛选获得转基因植株,通过pcr鉴定、sds-page、westernblot对kgf-2蛋白表达进行分析,提取油体蛋白涂抹法观察对c57bl/6小鼠的毛囊促生长作用。结果:双油体载体成功转入拟南芥基因组中;westernblot灰度分析可知,与单油体表达载体p1301-yo-k2相比,双油体融合表达策略可使kgf-2蛋白表达量提高2.5倍左右;动物实验结果表明油体融合蛋白具有良好的促毛囊增殖活性。