构建皮肤组织中特异表达hpv16-e6基因的小鼠模型

目的:构建特异在皮肤表达乳头瘤病毒(hpv16)e6基因的真核表达载体,并鉴定其在转基因小鼠体内的表达。方法:通过pcr方法扩增皮肤特异启动子pinv及hpv16-e6,将以上片段通过酶切连接,插入去掉cmv启动子的pcdna3.1(－)载体,获得dpcdna3.1(－)-pinv-e6载体;并显微注射制备其转基因小鼠,利用rt-pcr、westernblot及免疫组化技术检测获得的阳性小鼠体内e6的表达水平。结果:dpcdna3.1(－)-pinv-e6载体测序正确;经鉴定31只实验小鼠中,有2只小鼠携带外源基因,将其与野生型小鼠交配获得的f1代中又有2只阳性小鼠;且在获得阳性小鼠的皮肤组织中rt-pcr检测有e6的转录本,westernblot检测有e6蛋白表达,且免疫组化检测结果显示有e6在皮肤表达且引起皮肤微增生。结论:成功构建了pinv-e6转基因模型小鼠,hpv16-e6基因在小鼠皮肤中特异表达,为进一步研究hpv16-e6在癌症中的作用奠定了基础。