利用不同碳源进行毕赤酵母高密度发酵及tef-1启动子指导下的hpv16_l1蛋白表达

目的:研究不同碳源对于毕赤酵母菌株在发酵罐中高密度生长,以及对组成型翻译延伸因子-1(tef-1)启动子指导下hpv16_l1蛋白表达的影响。方法:利用1.5l发酵罐使用不同碳源进行毕赤酵母的高密度发酵,检测在不同碳源利用情况下菌体的增殖动力学,并以westernblot动态分析hpv16_l1蛋白的表达水平。结果:以甘油作为碳源,菌体细胞湿重可达到510g/l(od600为189.4),hpv16_l1的表达在72h之前保持高水平;在甲醇和葡萄糖中菌体细胞湿重都可达到220g/l左右(od600分别为75.3和77.3),甲醇利用下hpvl1蛋白在144h后仍保持较高水平表达,葡萄糖中60hhpvl1表达开始显著下降;在山梨醇作为碳源情况下菌体未能在发酵罐中获得高密度生长;总体上,甘油作为碳源在72h左右可获得最高的目的蛋白收获总量。结论:为实现毕赤酵母高密度生长与异源基因在tef-1启动子指导下高效表达,以及hpvl1蛋白的简易、有效制备提供了基础。