slice体外组装方法的优化和应用

slice(seamlessligationcloningextract)是一种利用细胞裂解物体外无痕组装dna的方法。针对细胞裂解物来源、λ重组系统的表达及组装片段摩尔比例等方面对现有slice方法进行优化。首先,排除了酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的细胞裂解物在现阶段用于体外组装的可能性。同时,在大肠杆菌dh10b中导入l-阿拉伯糖诱导表达的λ重组系统,验证所构建的大肠杆菌的细胞裂解物可在体外拼接dna片段,并将该种来源细胞裂解物用于后续组装。其次,设计并构建根据转化子颜色筛选阳性克隆的方法,并以该方法计算不同摩尔比例片段组装时的正确率。最后,使用优化过的slice方法,成功组装可在酿酒酵母体内表达的黑色素合成模块。