ctni-linker-tnc融合蛋白的原核表达及鉴定

从pubmed中查找人心脏ctni和ctnc的cdna序列,在两者之间加上15个中性氨基酸残基(g4s)3的linker编码序列,并分别构建原核表达质粒pet32a-ctni-linker-tnc和pet28a-ctni-linker-tnc,转化入大肠杆菌表达菌株bl21(de3)中,用异丙基硫代-β-d-半乳糖苷(iptg)诱导其表达。通过sds-page电泳和间接elisa对目的蛋白进行初步鉴定,并优化表达条件以实现目的蛋白的可溶性高表达。用标准抗ctni单克隆抗体和标准抗ctnc单克隆抗体对目的蛋白进行westernblot鉴定和双抗体夹心elisa鉴定,同时用八位心肌梗塞患者血清做间接elisa鉴定。结果表明,ctni-linker-tnc融合蛋白在表达载体pet32a中实现了可溶性高表达,最佳表达条件为28℃、0.4mmol/liptg、诱导表达5h;且融合蛋白具有较好的免疫原性,保存了ctni和ctnc单体的天然结构,有望成为天然ctni-tnc复合物的替代物,为下一步制备高特异性的抗ctni-tnc复合物的单克隆抗体奠定了基础。