稳定表达鼠源整联蛋白αvβ6的cho-677细胞系的构建

口蹄疫是由口蹄疫病毒(fmdv)引起的一种高度接触性传染病,主要侵害偶蹄动物。乳鼠常作为一种重要的实验动物模型用于fmdv的研究;整联蛋白αvβ6是fmdv的重要受体之一。为深入研究整联蛋白αvβ6在fmdv感染乳鼠中所发挥的作用,克隆了乳鼠整联蛋白αvβ6的两个亚基,并将其导入中国仓鼠卵巢细胞(chinesehamsterovary,cho-677)基因组中,构建了稳定表达乳鼠整联蛋白αv和β6亚基的细胞系cho-677-mαvβ6,并分别选用两种不同血清型的野生型fmdv毒株asia1/hn/cha/06和o/by/cha/2010感染细胞系来分析细胞系对fmdv的易感性。首先通过pcr和间接免疫荧光试验证明了细胞系中整联蛋白αvβ6在基因水平成功导入,在蛋白水平成功表达。然后,通过实时荧光定量rt-pcr检测病毒rna拷贝数,并结合tcid50试验测定了代表毒株在两个细胞上的生长曲线。结果表明,与亲本细胞cho-677相比,细胞系cho-677-mαvβ6对fmdv更易感,从αvβ6的功能性上进一步验证了细胞系被成功构建。