一种大肠杆菌噬菌体新裂解酶的表达与活性检测

？前期分离得到1株具有较强裂解能力的大肠杆菌噬菌体vb_ecomep3。测序后发现，噬菌体vb_ecomep3的裂解酶基因在大肠杆菌噬菌体中尚未报道，能够编码一种新的裂解酶，并与绿脓杆菌噬菌体裂解酶具有很高同源性。为了探讨该裂解酶对大肠杆菌和绿脓杆菌的裂解活性，克隆了vb_ecomep3的裂解酶基因，经原核表达和纯化，体外评价了lysep3裂解活性。结果表明：克隆裂解酶基因lysep3长为492bp；表达蛋白分子质量为17.7ku；裂解酶单独作用时，对大肠杆菌和绿脓杆菌均不能裂解，但是能够显著抑制生长；与柠檬酸配合使用（0.5mg/ml终浓度的lysep3和05mmol/l终浓度的柠檬酸），对大肠杆菌和绿脓杆菌均表现出较好的裂解能力，作用从2~24h持续有效，细菌数量分别下降7.2倍和17.3倍。该结果表明，vb_ecomep3的裂解酶不但在基因序列上与绿脓杆菌存在进化关系，在功能上也具有相关性。该研究为解析裂解酶结构与功能的关系提供了一个良好的例证，同时有助于裂解酶的广谱性改造。