弓形虫mapk1基因的克隆与原核表达

？为获取具有生物学活性的弓形虫mapk1蛋白,根据genbank中编码mapk1的已知序列设计并合成1对引物,用ncoⅰ和hindⅲ双酶切后,连接到同样双酶切的原核表达载体pet-28a上,构建重组表达质粒pet-28amapk1并转化至e.colibl21感受态,用iptg诱导表达,表达产物用ni2+螯合柱亲和纯化,纯化后进行sds-page和westernblotting分析。结果表明:表达质粒在e.colibl21中得到表达,克隆的mapk1基因与genbank中收录的基因序列同源性为99.9%。对重组质粒进行酶切鉴定,获得1599bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,成功地构建了重组质粒pet-28amapk1。ni2+螯合柱纯化后蛋白浓度为0.26mg/ml,可用作免疫原,经sds-page电泳显示pet-28amapk1融合蛋白的分子量约为58ku。westernblotting显示融合蛋白具有良好的抗原性。