脑缺血再灌注损伤后miR-29a及AQP4的表达及关系

目的:探讨脑缺血再灌注损伤(CIRI)后miR-29a和水通道蛋白4(AQP4)的表达及相互关系。方法:通过Targetscan软件预测及双萤光素酶报告实验验证AQP4为miR-29的靶基因;将20只雄性成年C57BL/6J小鼠随机分为4组:假手术组、脑缺血后再灌注(I/R)6 h、12 h、24 h组,每组5只,建立CIRI模型。通过采用实时定量PCR法(real time PCR)比较随再灌注时间的逐渐延长各组缺血区域(主要是缺血半暗带)miR-29a的表达情况,同时免疫荧光法检测AQP4表达;另外,将新生小鼠原代培养的星型胶质细胞分为正常组、脂质体转染miR-29a mimics组和miR-29a inhibitor共3组,建立体外糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/RX)模型后,采用real time PCR和免疫印迹法(Western Blot)分别比较3组miR-29a及AQP4的表达。结果:Targetscan软件预测miR-29与AQP4 mRNA的3'UTR区存在可能的结合位点,双萤光素酶报告实验验证miR-29是与AQP4序列结合的。体内实验中,随再灌注时间的逐渐延长,与对照组相比,I/R组缺血半暗带区域内miR-29的表达明显下降(P<0. 01);与miR-29a表达趋势相对应,AQP4在半暗带区的表达增强。体外实验中,miR-29a mimics和miR-29a inhibitor转染星型胶质细胞后,可分别增强或抑制miR-29a,而同时抑制或增强AQP4的表达;OGD/RX后,miR-29a表达下降而AQP4的表达增高(P<0. 05)。结论:CIRI后miR-29a显著下调,伴随AQP4的表达升高,提示miR-29a可能通过对星型胶质细胞上AQP4的负调控改善CIRI,从而对CIRI后脑水肿发挥保护作用