Ezrin基因沉默通过降低Calpain-1活性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的ABCA1降解

目的 探讨埃兹蛋白(Ezrin)基因表达降低对RAW264.7钙激活中性半胱氨酸蛋白酶(Calpain-1)活性及三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达的影响。 方法 实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测靶向作用于Ezrin基因的小干扰RNA(siRNA )的抑制效率。Western blot法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及联合加入Ezrin siRNA后Calpain-1的蛋白表达水平变化。Western blot法检测AngⅡ及联合加入Calpain抑制剂N-乙酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-L-正亮氨酸(ALLN)、Ezrin siRNA 后对ABCA1蛋白表达水平的影响。 结果 Ezrin siRNA转染组较对照组Ezrin的mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。Western blot结果显示AngⅡ可上调Calpain-1的活性(4.92±0.23比1.00±0.17,P<0.05),而Ezrin siRNA可逆转Calpain-1的活性上调(0.23±0.21比4.92±0.23, P<0.05)。此外,AngⅡ处理后ABCA1蛋白表达下调(0.167±0.055比0.732±0.072,P<0.05),这种作用可被Ezrin siRNA逆转(0.611±0.048比0.167±0.055,P<0.05),而给予Calpain抑制剂ALLN干预未能进一步提高ABCA1蛋白水平。 结论Ezrin可能通过Calpain-1途径在AngⅡ诱导的ABCA1表达降低过程中发挥重要作用