VEGF/PELA/bFGF 混合微囊促进大鼠 BMSCs 成血管分化研究

目的观察 VEGF/聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸共聚物（polylactide-polyethyleneglycol-polylactic acid copolymer，PELA）/ bFGF 对 SD 大鼠 BMSCs 成血管分化作用。 方法经全骨髓贴壁法分离培养 BMSCs 并传代。取第 3 代 BMSCs 行 Wright-Giemsa 染色及流式细胞术鉴定。利用复乳溶剂挥发法制备 VEGF/PELA/bFGF（A 组）、PELA/bFGF（B 组）、VEGF/PELA（C 组）及 PELA（D 组）微囊。对 PELA 微囊行降解性能及细胞毒性检测，VEGF/PELA/bFGF 混合微囊行 VEGF 及 bFGF 体外释放检测。取 4 组微囊缓释上清液分别与第 3 代 BMSCs 培养。培养 1、3、7、14、20 d 于倒置显微镜下观察细胞形态变化；21 d 时，行摄取 Dil 标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI-labeled acetylated low density lipoprotein，Dil-ac-LDL）及 FITC 标记的荆豆凝集素（FITC-labeled ulex europaeus agglutinin I，FITC-UEA-I）实验，观察细胞摄取能力；同时行 Matrigel 基质胶小管形成实验，定量分析小管形成指标（节点数、交叉点数、主干数及主干长度）。 结果经鉴定分离培养的细胞为 BMSCs。PELA 微囊在 37℃ 恒温条件下降解时程超过 20 d，且对 BMSCs 活力无明显影响。VEGF/PELA/bFGF 混合微囊体外释放检测显示，至 20 d 时 VEGF、bFGF 累积释放量分别超过 95%、80%。倒置显微镜下观察共培养期间 A、B、C 组 BMSCs 均出现形态学变化，其中 A、B 组 20 d 细胞呈典型内皮细胞“铺路石”样改变。荧光显微镜观察，A 组双荧光标记细胞最多，B 组次之，C 组较少，D 组几乎不具备内皮细胞特有的摄取功能。Matrigel 基质胶小管形成实验示，A、B 组诱导细胞在 Matrigel 基质胶上均形成网格状结构；定量分析显示 A、B 组节点数、交叉点数、主干数以及主干长度均多于 C、D 组（P<0.05）。A 组节点数以及主干长度多于 B 组（P<0.05）；两组交叉点数、主干数差异无统计学意义（P>0.05）。 结论VEGF/PELA/bFGF 混合微囊具有显著促进 BMSCs 成血管分化的能力