gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响

【目的】构建gga-miRNA-155前体基因（pre-gga-miRNA-155）真核表达载体，验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果，探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155，并将其克隆入pMD-18T载体，构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155，将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接，构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155，对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中，应用实时荧光定量PCR ( Real-time PCR )检测gga-mi-RNA-155的表达水平，利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154 bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155，瞬时转染MDCC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加，且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体，其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155，且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖