马铃薯5种病毒多重pcr检测技术的建立及应用

采用多重rt-pcr方法，建立可同时检测马铃薯x病毒（pvx）、马铃薯m病毒（pvm）、马铃薯y病毒（pvy）、马铃薯a病毒（pva）和马铃薯s病毒（pvs）的方法。根据genbank中pvx、pvm、pvy、pva及pvs（cp）基因序列设计特异引物，对多重rt-pcr退火温度、循环次数、延伸温度、引物组合浓度进行优化，建立了能同时检测5种马铃薯病毒的多重rt-pcr方法。该方法能同时扩增出pvx、pvm、pvy、pva及pvs特异片段，其大小分别是138、213、369、468和657bp。测序结果表明，5种病毒的序列与相应参考序列相似性达到97%以上。灵敏度分析结果表明，多重rt-pcr方法能够检测植物组织量为10-3mg。应用建立的多重rt-pcr检测方法对田间样品和组培苗进行检测，结果显示，该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的5种马铃薯病毒。