反向模式-强阳离子交换-反向模式二维色谱法测定人血浆中甲氨蝶呤浓度

建立了反向模式-强阳离子交换-反向模式(Reversedphase-strongcationexchange-reversedphase)二维色谱平台测定人血浆中甲氨蝶呤浓度的方法.样品经三氯醋酸沉淀蛋白后,在ASTONC8一级柱(100mm×4.6mm,5μm)上完成初分离,通过六通阀切换,经ASTONSCX中间级(20mm×4.6mm,5μm)二次分离和储存,在SACC8二级柱(100mm×4.6mm,5μm)上完成最后分离,并测定.一级柱流动相为10mmol/L醋酸铵-乙腈(90:10,V/V,以醋酸调至pH3.8),流速为1.0mL/min;中间级流动相为10mmol/LH3PO4溶液(pH3.0);二级柱流动相为50mmol/L醋酸铵-乙腈(87:13,V/V,以醋酸调至pH5.2),流速为1.2mL/min,检测波长306nm.单次分析时间4min,线性范围0.09~5.1μmol/L,检出限为0.005μmol/L,日内RSD小于1.8%,日间RSD小于3.5%,相对回收率99.1%~101.25%,绝对回收率85.7%~86.4%.本方法简便、准确,适合日常血药浓度监测和药代动力学研究.