龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达

【目的】克隆龙眼Dimocarpuslongan己糖激酶（Hexokinase,HXK）基因，并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.【方法】以龙眼总RNA为模板，采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列，构建pET-32a-DlHXK原核表达载体，转化到大肠埃希菌EscherichiacoliRosetta(DE3)中诱导表达.【结果和结论】成功克隆龙眼己糖激酶基因的cDNA全长序列，命名为DlHXK，登录号为KF776906.1.龙眼DlHXK序列全长2101bp，包括1个1488bp的开放阅读框，预测编码495个氨基酸；进化树和相似性分析发现，该基因与温州蜜柑Citrusunshiu的相似性最高，达到了82%；荧光定量表达分析表明，DlHXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升；经IPTG诱导和SDS-PAGE检测，所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见，利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因，构建原核表达载体，并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中获得高效表达.