脂质体介导遗传转化双孢蘑菇菌褶及1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(aco)功能初探

？本研究旨在建立一种高效的双孢蘑菇(agaricusbisporus)遗传转化方法，并以此方法构建双孢蘑菇1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacidoxidase,aco)的rnai突变株，研究该基因的功能，探索双孢蘑菇的乙烯生物合成途径。将脂质体和构建的双孢蘑菇aco部分编码区序列的双链rna表达质粒pbhg-dsaco按1μl∶2.5μg混匀后稀释1000倍，与幼嫩双孢蘑菇子实体的菌褶组织细块(长约4mm)在室温下共培养100min，然后在再生培养基(regenerationcompletemedium,rcm)平板中25℃培养7d左右，挑取萌发的组织块移植于含潮霉素的pda平板中进行筛选和继代培养，再经pcr鉴定获得转化子。结果表明，构建的双孢蘑菇aco基因rnai转化子遗传稳定，aco基因表达量比出发菌株降低47%~74%(p＜0.01)，aco酶活力和乙烯产量分别降低68%~86%和27%~48%(p＜0.05)，表明双孢蘑菇具有和高等植物相同的合成乙烯的acc途径。本研究结果提示，脂质体介导转化双孢蘑菇菌褶方法简便高效，为双孢蘑菇的遗传改良提供了新的高效分子生物学手段。