脂肪分化相关蛋白通过抑制中性胆固醇酯水解酶表达促进RAW264.7细胞内脂质积蓄

目的 探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)调控中性胆固醇酯水解酶(nCEH)表达进而介导脂质积蓄的作用机制。 方法 用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感染RAW264.7巨噬细胞,筛选出Adipophilin沉默细胞株和高表达细胞株。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析技术(Western blot)分别检测nCEH的mRNA和蛋白表达水平,液体闪烁计数仪、高效液相色谱法检测细胞内胆固醇流出及胆固醇酯含量。 结果 ①高表达Adipophilin的细胞组胆固醇、胆固醇酯含量明显高于空白对照组(P＜0.01),而沉默Adipophilin表达的细胞组则显著低于空白对照组(P＜0.01),Adipophilin可抑制nCEH mRNA和蛋白的表达。②用100 nmol/L蛋白激酶Cδ(PKCδ)激动剂佛波酯(PMA)孵育高表达Adipophilin的RAW264.7细胞30 min后,nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而用100 nmol/L PKCδ抑制剂卡马拉素(Rottlerin)同样孵育30 min后,nCEH的表达水平较对照组增高(P＜0.05)。 结论 Adipophilin促进巨噬细胞内脂质积蓄可能通过抑制nCEH表达来实现,在这一调控机制中PKCδ发挥了重要作用