重大检疫性害虫玉米根萤叶甲的种特异性SS-COⅠ快速检测技术研究

玉米根萤叶甲在欧洲和美国是一种严重为害玉米的入侵性害虫, 传播速度快, 侵入我国的可能性极高。本文针对其难以快速准确进行形态鉴别的问题, 以玉米根萤叶甲为研究对象, 以其他9种/生物型叶甲总科常见害虫为参照, 采用基于COⅠ基因的种特异性PCR方法(species-specific COⅠ, SS-COⅠ), 研究其快速分子检测鉴定技术。通过提取10种/生物型叶甲DNA和通用型引物扩增测序, 获得其基因片段的碱基序列, 并比对分析设计1对玉米根萤叶甲特异性引物(DvvZCE1/DvvZCF1), 其扩增片段为462 bp。种特异性检验结果显示, 该对引物只对玉米根萤叶甲的COⅠ基因具有扩增能力, 对其他常见叶甲类害虫, 包括玉米双斑长跗萤叶甲、榆黄毛萤叶甲、黄曲条跳甲、油菜蚤跳甲、黄点直缘跳甲、莲草直胸跳甲、枸杞负泥虫以及褐足角胸叶甲的棕黄型和蓝绿型没有扩增能力, 该对引物不仅对成虫有很好的扩增效果, 对单粒卵、2龄幼虫以及成虫残体(包括触角、头部、胸部、腹部、前足、后足)也具有同样的扩增效果, 其最低检出阈值为102.73 pg/μL(相当于1/122 880头雌性成虫)。玉米根萤叶甲特异性SS-COⅠ 检测技术在其口岸检疫, 以及有效阻截中具有重要意义